Nematodos.

 

Son Gusanos cilíndricos no segmentados, de vida libre o parásitos.

Viven generalmente como saprofitos, en cualquier tipo de suelo húmedo y en fondos lodosos marinos y de algunas lagunas y pantanos. Los paracitos son frecuentemente grades (de unos 5mm), y en vertebrados es casi imposible no encontrarlos generalmente es su tracto digestivo, en plantas se encuentran a nivel microscópico y se ubican en la parte inferior y en nódulos, aquellos migratorios en vegetales forman grandes colonias cercanas a las raíces.

Colecta de parásitos.

Existen dos métodos: el directo y el indirecto. El método directo consta de la búsqueda y extracción de los nematodos.

·   Parásitos en animales: Reptiles aves y mamíferos son excelentes huéspedes, pero se prefiere estudiarlos en peces y anfibios por ser menos prejudicial.

Se deben utilizar guantes de hule y tomarse las medidas necesarias para evitar la contaminación.

Inmediatamente de matar al huésped, se coloca sobre una charola y se abre con ayuda de un equipo de disección, desde la boca hasta el ano. Se sacaran a los especímenes con ayuda de una pinza de disección y se colocaran en una solución salina para mantenerlos, si los huéspedes son de sangre fría se preparara la solución de la siguiente forma:

Cloruro de sodio=7g.       Agua destilada= 1000cc.

Si son vertebrados de sangre caliente se aumenta el sodio a 8.5g.

Se colocaran en cajas Petri rotuladas con el lugar de la obtención.

Con ayuda del microscopio de disección se buscaran los especímenes más pequeños de todo el tubo digestivo y se trataran de la forma citada.

Las larvas se encuentran en pequeños quistes en las paredes del tubo digestivo.

Se puede seguir de la misma manera con las demás vísceras del cuerpo de la misma manera, mojando ocasionalmente con la solución salina.

Se puede seguir el mismo proceso con los invertebrados.

·         Parásitos de Vegetales: Observar directamente a las plantas es el método de encontrar e identificar a estos Fito-parásitos. Muchas de las hembras de estos paracitos  encontrados en las zonas subterráneas de las plantas son sedentarias y toman un aspecto globoso.

En los métodos indirectos los hay tantos que solo se mencionaran algunos.

Ø  Obtención de muestras:

a)      Suelo. Introduciendo oblicuamente una pala, y se toma solamente la tierra húmeda y próxima las raíces y se colocara en una bolsa de polietileno.

b)      Raíces. Se tomara a toda la panta enferma junto con la tierra que rodea su sistema radicular para evitar perdida de nematodos y se colocara en una bolsa de polietileno la cual se deberá rotular así como mantenerla con niveles adecuados de humedad y temperatura.

Ø  Extracción de nematodos en raíces:

Método de incubación- Sera mayormente favorable si tiene agallas puesto que el método es más apropiado para endoparásitos.

a)      Los sistemas radiculares debe consistir en raíces gruesas de por lo menos 1cm.

b)      Coloque las raíces en una cacerola y lávelas. Si contiene ectoparásitos la mayoría se desprenderá y el método será más efectivo si quedan bien limpias las raíces.

                          c)  Escúrralas y deposítelas 
                               en un frasco apropiado, 

                                sin llenarlo de más.

d)      Cubra pero no cierre herméticamente.

e)      Rotule y deje reposar 

por dos a siete días.

 Al sentir las condiciones 

anormales los nematodos 

migraran hacia afuera de las raíces.

f)       Al finalizar el periodo de incubación, llene el frasco con agua y ciérrelo herméticamente, agite y escurra.

g)      Lave inmediatamente el tamiz sobre una charola.

h)      Repita el proceso a) y b), dos veces mas con la misma muestra, agitando y recogiendo las muestras con el mismo tamiz.

i)        Reduzca el volumen de la suspensión de la charola.

j)        Observe directamente al microscopio.

Ø  Método de embudo de Baerman:

Se utiliza para la extracción de nematodos del suelo o de material vegetal macerado. Se basa en la movilidad que presentan los nematodos lo que los hace migrar hacia el fondo del embudo con lo que con tierra húmeda la obtención de algunos géneros es rápida sin en cambio algunos tipos por sus movimientos torpes son muy difíciles de obtener ya que como algunas hembras presentan además una forma esférica o hinchada su movilidad y paso por el filtro es difícil.

El dispositivo consiste en un soporte metálico con un anillo donde se suspende un embudo de cristal con cuello largo. Unido al tubo del embudo va un trozo de tubo de goma de unos 10 cm, que se cierra en su extremo libre mediante unas pinzas de Mohrt.

El embudo se llena de agua dejando libres unos 2cm bajo el borde. Sobre el embudo se coloca un pedazo de tela de alambre en forma de cacerolita, a la que se le sobrepone un pedacito de la tela de muselina, cuyos poros poseen el diámetro necesario. 

a)      Para poseer datos cuantitativos, se pesan 100g de suelo y se depositan sobre el papel que está en la rejilla. Se extiende uniformemente.

b)      Asegúrese que el nivel del aguad el embudo rebase levemente la rejilla.

c)       Doble el papel facial de manera que ninguno de sus bordes salga del embudo.

d)      Rotule en embudo.

e)      Mantenga siempre el nivel de agua adecuado.

f)       Esperar 48 hrs, para la extracción.

g)      Terminando este periodo abra las pinzas de Mohrt y tome  de 20 a 30 cc de agua.

h)      Observe al microscopio estereoscópico.

Ø  Manipulación.

Una vez obtenidos los Fito-parásitos se procede como sigue:

o   Pesca: Se usan cerdas de plástico o cualquier cepillo y se afilan al microscopio posteriormente se pegan con algún cemento líquido a algún sostén de madera, vidrio o metal. También pueden usarse alfileres entomológicos del # 000. El movimiento es parecido a recoger espagueti.

o   Como se mata a los nematodos Fito-parásitos: Se debe matar a los nematodos de una manera determinada para evitar su distorsión.

o   Muerte de nematodos en un portaobjetos: Exponer el portaobjetos por unos segundos al calor de un mechero. Se fijan inmediatamente trasfierendolos al fijador o agregando una gota de fijador doblemente concentrado, igual al que contiene los nematodos.

o   Muerte en masa: Reduciendo el volumen de la suspensión por medio de  centrifugación (1500 r.p.m) durante uno o dos minutos, o por gravedad.

a)      Agite el recipiente y sumerja en agua hirviendo durante un minuto. Fíjelos con la concentración ya dicha de fijador.

b)      Agregue igual volumen de agua hirviendo (muerte).

c)       Agregue igual volumen de formalina al 5% hirviendo (muerte fijado).

Ø  Fijación de Fito-parásitos.

Entre las mezclas fijadoras más conocidas que se pueden usar, está la F.A.A y el Formol, en soluciones diluidas al 2.5%.

Otra mezcla es la TAF, F.A.

Ø  Montaje de nematodos Fito-parásitos.

Montajes temporales:

ü  Directo: Transferir los nematodos ya fijados a un portaobjetos con una gota de fijador. Coloque varillas de vidrio del mismo ancho que los nematodos formando así un triángulo imaginario sobre el cual colocaremos el portaobjetos calentado en un mechero y fijado con barniz de uñas.

ü  Lactofenol: Agregue un pequeño volumen de azul de algodón al 0.02% hasta 0.0025% para teñir el lactofenol. Caliéntelo a  70º C y colóquelo en un portaobjetos. Deposite los nematodos.

                                      

               

Generalidades de nematodos